產(chǎn)品描述
本品是采用大腸桿菌TOP10菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。本品使用pUC19質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)108 cfu/μg，廣泛適用于高效的DNA克隆和質(zhì)粒擴(kuò)增，能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定遺傳。
TOP10感受態(tài)細(xì)胞基因型：F-mcrA △(mrr-hsd RMS-mcr BC) 80lacZ△M15 △lac X74 recA1 ara△139 △(ara-leu) 7697 galU galK rpsL (Strr) endA1 nupG
TOP10 Chemically Competent Cell （TOP10化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞）
運(yùn)輸與保存方法
干冰運(yùn)輸。
TOP10感受態(tài)細(xì)胞-80℃保存，pUC19質(zhì)粒-20℃保存。有效期半年。
注意事項(xiàng)
1）感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-80℃，不可反復(fù)凍融和放置時(shí)間過長，以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。
2）整個(gè)轉(zhuǎn)化操作，嚴(yán)格根據(jù)相應(yīng)溫度及無菌條件要求進(jìn)行。
3）為確保*高轉(zhuǎn)化效率，整個(gè)操作過程應(yīng)盡量輕柔，并保持低溫。
TOP10 Chemically Competent Cell （TOP10化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞）4）為防止轉(zhuǎn)化不成功，可以保留部分連接反應(yīng)液，以重新轉(zhuǎn)化，*低化實(shí)驗(yàn)可能遇到的風(fēng)險(xiǎn)。
使用方法
1）取100 μl感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中融化。
【注】：一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用，應(yīng)注意所用的DNA體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。
2）向100 μl感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA，輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，在冰浴中靜置30min。TOP10 Chemically Competent Cell （TOP10化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞）
3）將離心管置于42℃水浴中放置60-90 s，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中，使細(xì)胞冷卻2-3min，該過程不要搖動(dòng)離心管。
4）向離心管中加入900μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含***），混勻后置于37℃搖床振蕩培養(yǎng)45 min（150 rpm）， 目的是促使菌體復(fù)蘇，抗性基因表達(dá)。
5）將離心管內(nèi)容物混勻，吸取100μl已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)***的SOB或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌玻棒輕輕的將細(xì)胞均勻涂開。室溫正置10 min，待液體被吸收后，倒置平板，37℃培養(yǎng)12-16 h。
TOP10 Chemically Competent Cell （TOP10化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞）【注】：涂布菌液多少可根據(jù)轉(zhuǎn)化DNA量來調(diào)整。如果預(yù)計(jì)的克隆較少，可通過離心后吸除部分培養(yǎng)液，重新懸浮菌體后將其涂布在一個(gè)平板上。剩余菌液可置于4℃保存，一周之內(nèi)可重新涂板。
