Animal Blood Direct PCR Kit 全血直接PCR試劑盒

產(chǎn)品描述

  全血直接PCR試劑盒（Blood direct PCR Kit）可以直接對(duì)全血樣本進(jìn)行PCR，無(wú)需進(jìn)行DNA純化或樣品預(yù)處理，大大降低了污染風(fēng)險(xiǎn)，縮短時(shí)間和節(jié)約支出。
試劑盒中包含2 × Blood Master Mix，其中的血液DNA聚合酶專(zhuān)為全血DNA直接擴(kuò)增而設(shè)計(jì)，對(duì)全血樣品中的PCR抑制劑具有超強(qiáng)的抵抗力，可擴(kuò)增全血濃度高達(dá)40%。高度優(yōu)化的反應(yīng)體系使得Blood direct PCR Kit能夠從全血樣品中高效擴(kuò)增長(zhǎng)達(dá)7.5 kb的基因組片段。擴(kuò)增產(chǎn)物為平端，適用于HieffCloneTM快速克隆試劑盒 (11001ES25/ 11002ES10)。另外，試劑盒中配有與哺乳動(dòng)物和其他許多脊椎動(dòng)物兼容的引物預(yù)混液Positive control primer mix，可用于進(jìn)行陽(yáng)性對(duì)照反應(yīng)。Animal Blood Direct PCR Kit 全血直接PCR試劑盒
該試劑盒可用于直接擴(kuò)增的血樣類(lèi)型包括：新鮮血液、4℃貯存血液、冷凍血液以及儲(chǔ)存在Whatman 903®和FTA®商用卡上的干血漬，且兼容所有常規(guī)抗凝劑 (EDTA、檸檬酸鹽、肝素等)。Blood Direct PCR Kit已經(jīng)在許多哺乳動(dòng)物物種上進(jìn)行了成功測(cè)試，并成功擴(kuò)增了幾種禽類(lèi)全血。
Animal Blood Direct PCR Kit 全血直接PCR試劑盒

運(yùn)輸與保存方法
冰袋（wet ice）運(yùn)輸。產(chǎn)品-20 oC保存。
質(zhì)量控制
50 μl PCR體系中，以5 μl人全血為模板擴(kuò)增7.5 kb片段。35個(gè)循環(huán)后將1/10 PCR產(chǎn)物進(jìn)行1%瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，可見(jiàn)有單一的7.5 kb條帶。
注意事項(xiàng)
1) 推薦血液模板使用量為反應(yīng)總體積的1/10，即50 μl的反應(yīng)體系內(nèi)加入5 μl全血。如全血使用體積超過(guò)反應(yīng)總體積的1/10，可能需要進(jìn)一步調(diào)整Mg2+濃度。
2) 吸取抗凝血，尤其是長(zhǎng)期存放過(guò)的抗凝血時(shí)，應(yīng)盡量避免吸取血液凝塊。Animal Blood Direct PCR Kit 全血直接PCR試劑盒
3) 延伸時(shí)間按30 sec/kb設(shè)定，請(qǐng)勿使用更長(zhǎng)的延伸時(shí)間。
4) PCR完成后，推薦將反應(yīng)液于1,000 × g (大約4,000 rpm) 離心1～3 min以沉淀血細(xì)胞碎片，之后取上清進(jìn)行下游分析。

全血擴(kuò)增引物設(shè)計(jì)注意事項(xiàng)
1) 引物3’端*后一個(gè)堿基選擇C或G；
2) 引物3’端*后8個(gè)堿基應(yīng)避免出現(xiàn)連續(xù)錯(cuò)配；
3) 引物3’端盡量避免出現(xiàn)發(fā)夾結(jié)構(gòu)；
4) 引物Tm值控制在60℃-72℃之間 (推薦使用軟件Primer Premier 5進(jìn)行計(jì)算)；
5) 引物額外附加序列，即與模板非配對(duì)序列，不應(yīng)參與引物Tm值計(jì)算；
6) 引物GC含量控制在40%-60%之間；
7) 正向引物和反向引物Tm值以及GC含量盡可能一致。

Animal Blood Direct PCR Kit 全血直接PCR試劑盒 操作方法

1. 反應(yīng)體系配制：

所有組分解凍后請(qǐng)充分搖勻，使用完畢后及時(shí)放回-20℃。