Hieff^TM Hot Start DNA Polymerase(HS DNA Polymerase)是經(jīng)過化學(xué)修飾的熱穩(wěn)定重組型Taq DNA Polymerase，在室溫下活性被完全封閉，只有經(jīng)過95℃加熱后活性才被釋放，可防止在樣品準(zhǔn)備及反應(yīng)升溫階段產(chǎn)生非特異擴(kuò)增和引物二聚體。與基于抗體的熱啟動(dòng)Taq酶相比，化學(xué)修飾的HieffTM Hot Start DNA Polymerase活性封閉更徹底，嚴(yán)謹(jǐn)性更高；與現(xiàn)有化學(xué)修飾的熱啟動(dòng)Taq酶相比，HieffTM Hot Start DNA Polymerase的激活時(shí)間只需要5分鐘，兼容現(xiàn)有的PCR程序。Hieff? Hot Start DNA Polymerase熱啟動(dòng)DNA聚合酶
Hieff^TM Hot Start DNA Polymerase的反應(yīng)緩沖液中的組分、濃度都經(jīng)過優(yōu)化，使得引物與模板結(jié)合的嚴(yán)謹(jǐn)性提高，從而*大程度的減少非特異擴(kuò)增和引物二聚體，非常適合于從復(fù)雜模板(基因組，cDNA)中擴(kuò)增低拷貝基因。PCR產(chǎn)物3’端帶A，可克隆至T載體。另外，產(chǎn)品中提供的PCR Enhancer可有助于高GC含量片段的擴(kuò)增。
Hieff? Hot Start DNA Polymerase熱啟動(dòng)DNA聚合酶

活性定義
用活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，74℃ 30分鐘內(nèi)，攝入10 nmol的全核苷酸為酸性不溶物的活性定義為1個(gè)活性單位（U）。
運(yùn)輸與保存方法
冰袋（wet ice）運(yùn)輸。收到產(chǎn)品后放到-20 oC保存。
質(zhì)量控制
核酸外切酶殘留檢測(cè)：10 U本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 oC下孵育1小時(shí)，DNA的電泳譜帶不發(fā)生變化。
核酸內(nèi)切酶殘留檢測(cè)：10 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 oC下孵育1小時(shí)，DNA的電泳譜帶不發(fā)生變化。
大腸桿菌殘留DNA檢測(cè): 50 μl體系中，加入2U本品，以ddH2O為模板，擴(kuò)增E.coil 16s rDNA基因。35個(gè)循環(huán)后擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行1% 瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，無(wú)擴(kuò)增條帶。Hieff? Hot Start DNA Polymerase熱啟動(dòng)DNA聚合酶
功能檢測(cè)：PCR體系中加入1.25U本品，以100 ng人基因組DNA為模板擴(kuò)增α-1-antitrypsin基因。35個(gè)循環(huán)后取10% PCR產(chǎn)物進(jìn)行1% 瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，觀察到單一的360 bp條帶。

引物設(shè)計(jì)注意事項(xiàng)
1）引物3’端*后一個(gè)堿基*好為G或者C；
2）引物3’端*后8個(gè)堿基應(yīng)避免出現(xiàn)連續(xù)錯(cuò)配；
3）引物3’端盡量避免發(fā)夾結(jié)構(gòu)出現(xiàn)；
4）引物的Tm值調(diào)整至55℃-65℃之間。
5）引物額外附加序列，即與模板非配對(duì)序列，不應(yīng)參與引物Tm值計(jì)算；
6）引物的GC含量控制在40%-60%之間；
7）正向引物和反向引物Tm值以及GC含量盡可能一致。Hieff? Hot Start DNA Polymerase熱啟動(dòng)DNA聚合酶