2×Hieff? Long PCR Master Mix (No Dye)

產(chǎn)品描述

  2×Hieff^TM Long PCR Master Mix (No Dye)包含Long Taq DNA Polymerase，dNTP以及優(yōu)化的緩沖體系，只需加入引物和模板即可進(jìn)行擴(kuò)增，大大簡(jiǎn)化實(shí)驗(yàn)的操作步驟，提高了高通量操作和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重現(xiàn)性。Long Taq DNA Polymerase是Taq DNA Polymerase與一種含有3’→5’外切酶活性（校對(duì)活性）的蛋白組成的混合酶，保真度是Taq DNA Polymerase的6倍。配合獨(dú)特的緩沖體系，Long Taq DNA Polymerase可從人基因組模板中擴(kuò)增長(zhǎng)達(dá)15 kb的片段。
Mix中不含有溴酚藍(lán)染料，其中的保護(hù)劑使得Mix 經(jīng)過(guò)反復(fù)凍融后仍可保持穩(wěn)定的活性。PCR產(chǎn)物的3’端帶A，可輕松克隆至T載體。
2×Hieff? Long PCR Master Mix (No Dye)

運(yùn)輸與保存方法
冰袋（wet ice）運(yùn)輸。收到產(chǎn)品后放到-20 oC保存。
質(zhì)量控制
核酸外切酶殘留檢測(cè)：20 μl本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 oC下孵育1小時(shí)，DNA的電泳譜帶不發(fā)生變化。
核酸內(nèi)切酶殘留檢測(cè)：20 μl本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 oC下孵育1小時(shí)，DNA的電泳譜帶不發(fā)生變化。
大腸桿菌殘留DNA檢測(cè): 50 μl體系中，以ddH2O為模板，擴(kuò)增E.coil 16s rDNA基因。35個(gè)循環(huán)后擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行1% 瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，無(wú)擴(kuò)增條帶。2×Hieff? Long PCR Master Mix (No Dye)
功能檢測(cè)：50 μl體系中，以100 ng人基因組DNA為模板擴(kuò)增dystrophin基因。30個(gè)循環(huán)后取10% PCR產(chǎn)物進(jìn)行1% 瓊脂糖凝膠電泳，EB染色，觀察到單一的15 Kb條帶。

注意事項(xiàng)
1. 操作注意事項(xiàng)
由于Long Taq DNA Polymerase在室溫下也有一定的反應(yīng)活性，建議在冰上配制PCR反應(yīng)體系，再置于PCR儀上進(jìn)行擴(kuò)增。這樣有利于提高擴(kuò)增的特異性，減少非特異擴(kuò)增，得到良好的PCR結(jié)果。2×Hieff? Long PCR Master Mix (No Dye)
2. 引物設(shè)計(jì)注意事項(xiàng)
1）引物3’端*后一個(gè)堿基*好為G或者C；
2）引物3’端*后8個(gè)堿基應(yīng)避免出現(xiàn)連續(xù)錯(cuò)配；
3）引物3’端盡量避免發(fā)夾結(jié)構(gòu)出現(xiàn)；
4）引物的Tm值調(diào)整至55℃-65℃之間。
5）引物額外附加序列，即與模板非配對(duì)序列，不應(yīng)參與引物Tm值計(jì)算；
6）引物的GC含量控制在40%-60%之間；
7）正向引物和反向引物Tm值以及GC含量盡可能一致。2×Hieff? Long PCR Master Mix (No Dye)