檸檬酸鹽緩沖液,0.5M,pH5.0實驗原理：

RNA是一類極易降解的分子，要得到完整的RNA必須*大限度地抑制提取過程中內(nèi)源性及外源性核糖核酸酶對RNA的降解。高濃度變性劑TRIzol，可溶解蛋白質(zhì)，破壞細胞結構，使核蛋白與核酸分離，失活RNA酶，檸檬酸鹽緩沖液,0.5M,pH5.0所以RNA從細胞中釋放出來時不被降解。細胞裂解后，除了RNA，還有DNA、蛋白質(zhì)和細胞碎片，通過氯仿、異丙醇等有機溶劑處理得到純化、均一的總RNA。

檸檬酸鹽緩沖液,0.5M,pH5.0實驗目的：

1．掌握真核生物細胞基因組RNA制備和定量的基本方法。

2．掌握反轉(zhuǎn)錄PCR的原理及實驗方法。

3．掌握PCR技術原理和基本實驗步驟。

實驗儀器和材料：

低溫冷凍離心機、烤箱、制冰機、移液器、冰箱，水平電泳槽、電泳儀、勻漿器、TRIzol、 氯仿、異丙醇、75％乙醇（DEPC H 2 O）配制、DEPC H 2 O

檸檬酸鹽緩沖液,0.5M,pH5.0實驗步驟：

1. 取50－100mg（新鮮或－70℃及液氮中保存的組織均可）置1.5ml勻漿器中，加入1ml TRIzol充分勻漿，室溫靜置5min。

2. 加入0.2ml氯仿，振蕩15s，靜置2min。

3. 4℃離心，12000g×15min，取上清置另一1.5ml離心管中。

4. 加入0.5ml異丙醇，將管中液體輕輕混勻，室溫靜置10min。

5. 4℃離心，12000g×10min，棄上清。

6. 加入1ml75％乙醇，輕輕洗滌沉淀。4℃離心，7500g×5min，棄上清。

7. 晾干，加入適量的DEPC H 2 O溶解（65℃促溶10～15min）。

8. 檸檬酸鹽緩沖液,0.5M,pH5.0快速電泳檢測RNA完整性。