BCA 蛋白定量試劑盒產(chǎn)品介紹
BCA(bicinchoninic acid)法蛋白濃度定量試劑盒是在世界上常用的蛋白濃度檢測(cè)方法之一BCA法基礎(chǔ)上改進(jìn)而成。眾所周知,二價(jià)銅離子在堿性的條件下,可以被蛋白質(zhì)還原成一價(jià)銅離子(biuret reaction),一價(jià)銅離子和獨(dú)特的BCA Solution A(含有BCA)相互作用產(chǎn)生敏感的顏色反應(yīng)。兩分子的BCA螯合一個(gè)銅離子,形成紫色的反應(yīng)復(fù)合物。該水溶性的復(fù)合物在562nm處顯示強(qiáng)烈的吸光性,吸光度和蛋白濃度在廣泛范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系,因此根據(jù)吸光值可以推算出蛋白濃度。
BCA 蛋白定量試劑盒產(chǎn)品特點(diǎn)
1. 步驟簡(jiǎn)單,45分鐘內(nèi)完成測(cè)定,比經(jīng)典Lowry法快4倍而且更加方便。
2. 靈敏度高,檢測(cè)濃度下限達(dá)到25μg/ml,*小檢測(cè)蛋白量達(dá)到0.5μg,待測(cè)樣品體積為1-20μl。
3. BCA法測(cè)定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的去污劑等化學(xué)物質(zhì)的影響,可以兼容樣品中高達(dá)5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的Tween 20,
60,80。
4. 在20-2000μg/ml濃度范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。
5. 檢測(cè)不同蛋白質(zhì)分子的變異系數(shù)遠(yuǎn)小于考馬斯亮藍(lán)法蛋白定量。
BCA 蛋白定量試劑盒產(chǎn)品儲(chǔ)存
本產(chǎn)品收到后按照上面指示溫度存放各成份,至少一年內(nèi)有效。蛋白標(biāo)準(zhǔn)長(zhǎng)期保存-20℃放置,常溫運(yùn)輸。
注意事項(xiàng)
1. 蛋白標(biāo)準(zhǔn)請(qǐng)?jiān)谌咳芙夂笙然靹?,再稀釋成一系列不同濃度的蛋白?biāo)準(zhǔn)。標(biāo)準(zhǔn)品曲線配制時(shí),如果吸量不準(zhǔn)確或者加樣槍不**會(huì)造成標(biāo)準(zhǔn)
曲線相關(guān)系數(shù)減小,可根據(jù)需要使用倍比梯度稀釋的方法來(lái)配制,或者使用**度高的加樣槍。
2. Solution A和Solution B混合成工作液時(shí)可能會(huì)有渾濁,但充分振蕩混勻后就會(huì)消失,成為淡綠色的透明溶液。
3. 需酶標(biāo)儀一臺(tái),測(cè)定波長(zhǎng)為540-590nm之間,562nm*佳;需96孔板。如果沒(méi)有酶標(biāo)儀,也可以使用普通的分光光度計(jì)測(cè)定,但是測(cè)定蛋白濃
度時(shí),需根據(jù)測(cè)定吸光度的杯子的體積,按比例調(diào)整A液,B液和樣品的體積。使用分光光度計(jì)測(cè)定蛋白濃度時(shí),每個(gè)試劑盒可以測(cè)定的樣品
數(shù)量可能會(huì)顯著減少。BCA 蛋白定量試劑盒
4. BCA蛋白定量試劑盒受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響,需確保無(wú)EGTA,EDTA低于10mM,二硫蘇糖醇低于1mM,β-巰基乙醇低于1mM。不適
用BCA法時(shí)建議使用Bradford法蛋白定量試劑盒。還可以考慮用超純水稀釋,透析/除鹽,ACETONE/TCA沉淀蛋白后重溶于超純水等方法來(lái)消
除干擾物質(zhì)的影響。
5. 為了加快BCA法測(cè)定蛋白濃度的速度可以適當(dāng)用微波爐加熱,但是切勿過(guò)熱。
6. 如發(fā)現(xiàn)樣品稀釋液或裂解液本身就有較高背景,請(qǐng)?jiān)囉肂radford法蛋白定量試劑盒。